NCI-H446(人小細胞肺癌細胞)

細胞名稱：NCI-H446     人小細胞肺癌細胞

組織來源：肺；轉(zhuǎn)移灶：肋膜滲出癌

培養(yǎng)條件：RPMI-1640 +10% FBS

形　　態(tài)：貼壁；上皮細胞樣

背　　景：該細胞是1982年由Carney D和Gazdar AF等從一位小細胞肺癌患者的胸腔積液中建立的。細胞的原始形態(tài)并不具有小細胞肺癌特征。這個細胞株是小細胞肺癌的生化和形態(tài)學(xué)上的變種，表達神經(jīng)元特有的烯醇酶和腦型肌酸激酶同工酶；**多巴脫羧酶、蠶素、抗****、催產(chǎn)素或胃泌**釋放肽未達到可檢測水平。與正常細胞相比，該細胞c-myc DNA序列擴增約20倍，RNA增加15倍。*初傳代培養(yǎng)基用含有5%FBS的RPMI-1640，另外添加10 nM氫化可的松、0.005 mg/mL胰島素、0.01 mg/mL轉(zhuǎn)鐵蛋白、10 nM 17-beta-雌二醇、30 nM 亞硒酸鈉。

NCI-H446(人小細胞肺癌細胞)操作說明：

1)對于常溫運輸?shù)募毎?，收到細胞后，檢查是否有運輸問題，即細胞培養(yǎng)瓶或管是否破損，細胞培養(yǎng)液是否溢出。若沒有運輸問題，請75%酒精**后，保留封口膜，放入細胞培養(yǎng)箱中靜置。嚴格檢查培養(yǎng)箱的參數(shù)：溫度，濕度和CO2濃度。細胞靜置時間一般為6-12小時后，細胞狀態(tài)穩(wěn)定后，即可開始后續(xù)操作。選用正確的細胞培養(yǎng)體系，NCI-H446(人小細胞肺癌細胞)嚴格按照說明書的培養(yǎng)條件進行培養(yǎng)。條件允許，培養(yǎng)的前三天內(nèi)做細胞拍照記錄，通過郵件發(fā)送給我們做及時狀態(tài)跟蹤。

2)對于干冰運輸?shù)募毎?，請取出冷凍管后，須立即放?/span>37C水槽中快速解凍，輕搖冷凍管使其在1分鐘內(nèi)全部融化，并注意水面不可超過冷凍管蓋沿，否則易發(fā)生污染情形。然后將其復(fù)蘇培養(yǎng)，次日更換培養(yǎng)液。

NCI-H446(人小細胞肺癌細胞)注意事項：

1)細胞漂?。号囵B(yǎng)瓶不開封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養(yǎng)箱。次日觀察，如細胞大部分又貼回瓶底，表明細胞活力正常，剩余漂浮的細胞可以離心去掉，留10ml培養(yǎng)液培養(yǎng)觀察，細胞生長至匯合度80%，進行消化傳代；如細胞還是不貼壁，將細胞離心收集轉(zhuǎn)到新培養(yǎng)瓶，原培養(yǎng)瓶加部分培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，中間注意觀察，我們的技術(shù)人員會一直跟蹤指導(dǎo)，直到問題解決。

2)對于生長緩慢的貼壁細胞：可采用適當(dāng)?shù)奶岣吲囵B(yǎng)基中血清濃度，或隔日換液的方法來保證細胞的狀態(tài)和生長速度。

3)對于生長不均的貼壁細胞：在培養(yǎng)過程中若出現(xiàn)細胞分布明顯不均時（即某一區(qū)域細胞已重疊生長，而旁邊則為一塊空白），此時可將細胞進行消化，重新打散，貼壁，加入新培養(yǎng)基進行培養(yǎng)。 

NCI-H446(人小細胞肺癌細胞)下面介紹幾種細胞培養(yǎng)過程中常見的污染：

一)桿菌污染：培養(yǎng)基中加入***可以減少此種污染，但也不是**的。

二)支原體污染：傳說中的黑焦蟲，長得暴快。24小時就滿視野都是了。污染源大多數(shù)情況下是培養(yǎng)用血清。

三)***污染：似乎無處不在，而且頑固得很。長得暴快(12h就能在細胞上面密布)。培養(yǎng)液澄清。低倍顯微鏡下像黑色的沙子鋪在細胞上，高倍鏡下呈樹枝狀或葡萄狀。

四)霉菌污染、比較常見的一種污染，常常來源于污染的空氣、水和器械。