2V6.11(人胚腎細(xì)胞)

細(xì)胞名稱：2V6.11     人胚腎細(xì)胞

組織來源：腎；用腺病毒前區(qū)4質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染

培養(yǎng)條件：MEM +10% FBS

形       態(tài)：貼壁；上皮細(xì)胞樣

背       景：Zeocin-抗性標(biāo)記的質(zhì)粒pVgRXR轉(zhuǎn)染得到293pVgRXR細(xì)胞。隨后，用包含編碼E4 24K的Ad5 E4 ORF6基因的質(zhì)粒pEKORF6轉(zhuǎn)染。pEKORF6從包含潮霉素抗性基因的質(zhì)粒pIndHydro衍生而來。載體包含SV40病毒序列。2V6.11細(xì)胞株*初從含潮霉素的培養(yǎng)液中用克隆環(huán)分離單克隆得到。2V6.11細(xì)胞誘導(dǎo)表達(dá)的人腺病毒E4 34KDa蛋白可通過**印跡法檢測。這株細(xì)胞可以用作研究腺病毒E4癌基因的工具。

2V6.11(人胚腎細(xì)胞)操作說明：

1)對于常溫運(yùn)輸?shù)募?xì)胞，收到細(xì)胞后，檢查是否有運(yùn)輸問題，即細(xì)胞培養(yǎng)瓶或管是否破損，細(xì)胞培養(yǎng)液是否溢出。若沒有運(yùn)輸問題，請75%酒精**后，保留封口膜，放入細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置。嚴(yán)格檢查培養(yǎng)箱的參數(shù)：溫度，濕度和CO2濃度。細(xì)胞靜置時間一般為6-12小時后，細(xì)胞狀態(tài)穩(wěn)定后，即可開始后續(xù)操作。選用正確的細(xì)胞培養(yǎng)體系，2V6.11(人胚腎細(xì)胞)嚴(yán)格按照說明書的培養(yǎng)條件進(jìn)行培養(yǎng)。條件允許，培養(yǎng)的前三天內(nèi)做細(xì)胞拍照記錄，通過郵件發(fā)送給我們做及時狀態(tài)跟蹤。

2)對于干冰運(yùn)輸?shù)募?xì)胞，請取出冷凍管后，須立即放入37C水槽中快速解凍，輕搖冷凍管使其在1分鐘內(nèi)全部融化，并注意水面不可超過冷凍管蓋沿，否則易發(fā)生污染情形。然后將其復(fù)蘇培養(yǎng)，次日更換培養(yǎng)液。

2V6.11(人胚腎細(xì)胞)注意事項：

1)細(xì)胞漂?。号囵B(yǎng)瓶不開封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養(yǎng)箱。次日觀察，如細(xì)胞大部分又貼回瓶底，表明細(xì)胞活力正常，剩余漂浮的細(xì)胞可以離心去掉，留10ml培養(yǎng)液培養(yǎng)觀察，細(xì)胞生長至匯合度80%，進(jìn)行消化傳代；如細(xì)胞還是不貼壁，將細(xì)胞離心收集轉(zhuǎn)到新培養(yǎng)瓶，原培養(yǎng)瓶加部分培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，中間注意觀察，我們的技術(shù)人員會一直跟蹤指導(dǎo)，直到問題解決。

2)對于生長緩慢的貼壁細(xì)胞：可采用適當(dāng)?shù)奶岣吲囵B(yǎng)基中血清濃度，或隔日換液的方法來保證細(xì)胞的狀態(tài)和生長速度。

3)對于生長不均的貼壁細(xì)胞：在培養(yǎng)過程中若出現(xiàn)細(xì)胞分布明顯不均時（即某一區(qū)域細(xì)胞已重疊生長，而旁邊則為一塊空白），此時可將細(xì)胞進(jìn)行消化，重新打散，貼壁，加入新培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。 

2V6.11(人胚腎細(xì)胞)下面介紹幾種細(xì)胞培養(yǎng)過程中常見的污染：

一)桿菌污染：培養(yǎng)基中加入***可以減少此種污染，但也不是**的。

二)支原體污染：傳說中的黑焦蟲，長得暴快。24小時就滿視野都是了。污染源大多數(shù)情況下是培養(yǎng)用血清。

三)***污染：似乎無處不在，而且頑固得很。長得暴快(12h就能在細(xì)胞上面密布)。培養(yǎng)液澄清。低倍顯微鏡下像黑色的沙子鋪在細(xì)胞上，高倍鏡下呈樹枝狀或葡萄狀。

四)霉菌污染、比較常見的一種污染，常常來源于污染的空氣、水和器械。