方陣滴定確定*佳條件時(shí),為什么選擇OD值在1.0左右

一般現(xiàn)在酶標(biāo)儀OD*大測到3左右，所以只要不高于這個(gè)就可以，保險(xiǎn)起見，可選擇2.0左右OD區(qū)間大，ELISA的工作濃度范圍也自然大點(diǎn).

個(gè)人覺得棋盤ELISA一定要選擇OD1.0的點(diǎn)是個(gè)誤區(qū)。首先不同型號的靈敏度應(yīng)該是不一樣的；其次OD為1.0指的是某個(gè)抗原抗體濃度條件下的OD值，并不代表通過此次棋盤得到的*佳抗原抗體的濃度所做的各種后續(xù)ELISA實(shí)驗(yàn)的值也是1.0左右，所以說選擇處于酶標(biāo)儀靈敏度的*佳狀況并不一定符合后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。（不善表達(dá)，不知自己描述清楚沒有）

我自己覺得要根據(jù)不同的實(shí)驗(yàn)類型（間接，雙抗夾心或是競爭等）來選擇*佳抗原抗體工作濃度。象競爭ELISA，做棋盤的目的是包被抗原和一抗的量，試想如果包被抗原太濃，意味著需要競爭抗原濃度也不能?。ó吘故歉偁帉κ植荒軕沂馓螅?，這就注定了競爭ELISA的檢測限不好（因?yàn)楦偁幙乖且獧z測的東西，所需濃度越大IC50也就越大）。而一抗也不能足量，否則即能與包被抗原反應(yīng)又能與檢測抗原反應(yīng)，就不能稱為競爭ELISA了。也不能太少，否則整體OD讀數(shù)太低。

雙抗夾心ELISA也是同樣的道理，找到包被抗體和酶標(biāo)抗體的平衡點(diǎn)，即能OD與本底之間的平衡點(diǎn)。