ELISA中雙抗體夾心法與間接法的區(qū)別在哪

雙抗體夾心法：

(1) elisa試劑盒包被：用0.05M PH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1～10μg/ml。在每個(gè)聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml，4℃過夜。次日，棄去孔內(nèi)溶液，用洗刷緩沖液洗3次，每次3分鐘。(簡稱洗刷，下同)。

(2) 加樣：加必定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中，置37℃孵育1小時(shí)。然后洗刷。(一同做空白孔，陰性對(duì)照孔及陽性對(duì)照孔)。

(3) 加酶標(biāo)抗體：于各反應(yīng)孔中，elisa試劑盒參與新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃孵育0.5～1小時(shí)，洗刷。

(4) 加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中參與暫時(shí)制作的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分鐘。

(5) 中止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中參與2M硫酸0.05ml。

(6)elisa試劑盒效果斷定：可于白色布景上，直接用肉眼調(diào)查效果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽性程度越強(qiáng)，陰性反應(yīng)為無色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號(hào)標(biāo)明。也可測O·D值：在ELISA檢測儀上，于450nm(若以ABTS顯色，則410nm)處，以空白對(duì)照孔調(diào)零后測各孔O·D值，若大于規(guī)矩的陰性對(duì)照OD值的2.1倍，即為陽性。間接法：用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1～10μg/ml，每孔加0.1ml，4℃過夜。次日洗刷3次。加必定稀釋的待檢樣品(不知道抗體)0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時(shí),洗刷。(一同做空白、陰性及陽性孔對(duì)照)于反應(yīng)孔中，參與新鮮稀釋的酶標(biāo)**抗體(抗抗體)0.1ml，37℃孵育30-60分鐘，洗刷,終究一遍用DDW洗刷。其他進(jìn)程同“雙抗體夾心法”的4、5、6。